我司可提供免疫系统人源化小鼠模型及药效评价：将自主研发的NCG小鼠是使用基因编辑技术敲除了NOD/ShiltJNju小鼠的Prkdc及Il2rg基因而获得的重度免疫缺陷品系。

NCG小鼠具有T细胞、B细胞、NK细胞缺失的特征，是迄今为止免疫系统缺陷最为彻底的小鼠模型，非常适合人外周血单个核细胞（PBMC）及人源造血干细胞（CD34+HSC）移植进行免疫重建。

NCG小鼠上移植CD34+HSC后，免疫重建效率高，主要重建T细胞和大量未成熟的B细胞，少量NK细胞和巨噬细胞等，可用于进行多种肿瘤免疫药物的评价。

【huPBMC-NCG项目介绍】

huPBMC-NCG小鼠是将人外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMC）移植到重度免疫缺陷小鼠NCG体内，从而获得的重建人免疫系统的NCG小鼠模型。

分别将来源于供体F和供体G的huPBMC注射到NCG小鼠中，分析huPBMC-NCG免疫重建小鼠的存活时间。由于植入的PBMC为异源免疫细胞，huPBMC-NCG小鼠会随着时间推移产生移植物抗宿主疾病（GvHD），即人源免疫系统攻击小鼠组织器官，最终导致小鼠死亡，缩短了huPBMC-NCG小鼠的使用窗口期。本研究发现NCG小鼠移植huPBMC一个月左右陆续出现死亡。

利用流式细胞技术检测huPBMC-NCG小鼠人源化进程中外周血中人白细胞比例。结果表明，随着时间推移，huPBMC-NCG小鼠外周血中人白细胞的比例逐渐增加，第三周时平均人白细胞比例超过50%。因为该模型会发生GvHD，推荐使用huPBMC-NCG小鼠时，根据实验需求在人源化程度和使用窗口期之间进行优化。数据以Mean ±SEM形式呈现。

利用流式细胞技术检测在huPBMC-NCG小鼠脾脏、外周血及骨髓中人白细胞的相对含量，结果表明huPBMC-NCG小鼠体内人白细胞分布具有明显的组织差异性，人白细胞水平从高到低为脾脏>外周血>骨髓。数据以Mean±SEM形式呈现。*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001。

分别使用两种不同Donor来源的huPBMC细胞构建huPBMC-NCG，并接种PDL1高表达细胞系MDA-MB-231构建皮下荷瘤模型。PBMC接种后会影响MDA-MB-231在NCG体内的成瘤速度。待肿瘤生长至平均体积约100 mm3时随机分为Vehicle（对照）组及Tecentriq给药组（n=5-6），使用相应药物进行治疗。每周给药2次，连续给药三周，可用于评估Tecentriq等靶向PD-1/PDL1通路药物的抗肿瘤效果。结果显示Tecentriq对肿瘤生长有明显抑制作用（PBMC-01 TGI=45.41%, PBMC-02 TGI= 56.96%）。数据以Mean ± SEM 形式呈现。

在huPBMC尾静脉移植NCG小鼠之前辐照处理NCG小鼠。由于植入的PBMC为异源免疫细胞，huPBMC-NCG小鼠会随着时间推移产生移植物抗宿主疾病（GvHD），即人源免疫系统攻击小鼠组织器官，最终导致小鼠死亡，缩短了huPBMC-NCG小鼠的使用窗口期。本研究发现辐照能够加速huPBMC-NCG免疫重建小鼠的GvHD的发生，缩短生存时间，非常适用于GvHD相关研究和药物开发及UCAR-T GvHD评价的动物模型。

【huHSC-NCG项目简介】

huHSC-NCG小鼠将人造血干细胞（HSC）移植到重度免疫缺陷小鼠NCG体内，从而获得的重建人免疫系统的NCG模型。

由于辐照可以清除小鼠骨髓中的造血干细胞，从而提高人源HSC移植后的重建水平，因此选用辐照处理后的NCG小鼠移植人源HSC。利用流式细胞技术检测辐照清髓效果。其中mCD45为小鼠白细胞标记物，mCD117为造血干细胞标记物。上图显示辐照后mCD45+mCD117+细胞群体比例为1.11%,显著低于未辐照组（13.5%）。表明150cGys剂量辐照6-7周NCG小鼠可达到理想的清髓效果。

huHSC-NCG小鼠存活时间可超过37周，且生存率与NCG野生型小鼠无显著差异。huHSC-NCG小鼠体重随时间变化呈增长趋势，前期与NCG野生型小鼠体重无显著差异，随着时间延长，huHSC-NCG小鼠体重下降，在实验终点，huHSC-NCG小鼠体重显著低于NCG野生小鼠（***P < 0.001）。数据以Mean ± SEM形式呈现。

利用流式细胞技术检测huHSC-NCG小鼠人源化进程中外周血中人白细胞水平。随着时间推移，huHSC-NCG小鼠体内人白细胞含量逐步提高，反映人免疫系统重建的进程。数据以Mean ± SEM形式呈现。

利用流式细胞技术检测huHSC-NCG小鼠进程中外周血中T细胞和B细胞水平。huHSC-NCG免疫系统重建早期，有大量未成熟、无功能的B细胞产生，随着时间推移，人B细胞比例逐步降低，T细胞水平逐渐增加。数据以Mean ± SEM形式呈现。

利用流式细胞技术检测huHSC-NCG小鼠进程中外周血中hCD4+T和hCD8+T细胞的变化情况。数据以Mean ± SEM形式呈现。

利用流式细胞技术检测huHSC-NCG小鼠进程中外周血中hCD25+hCD127-Treg细胞水平。数据以Mean ± SEM形式呈现。

第16周时对huHSC-NCG小鼠外周血进行流式分析，可在huHSC-NCG小鼠外周血中检测到多种人源免疫细胞，其中人白细胞比例高达50.1%（人白细胞比例高于20%则认为建模成功），表明本研究中huHSC-NCG人源化模型成功建立。